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大肠菌群检验方法

采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。　　乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。

　　分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。

　　证实试验：挑取平板上的ke疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。

　　报告：根据证实为大肠阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。

水中粪大肠菌群的常见检测方法

1、聚合酶链式技术

提取粪大肠菌群混悬液和待测水样的DNA，利用PCR技术扩增编码约260bp的LacZ基因（β-半乳糖苷酶基因）和约150BP的UdiA基因（β-D-半乳糖苷酶基因）的DNA，分别检测大肠菌群数和大肠。

2、荧光原位杂交技术

由于粪大肠菌群特异的DNA序列，借助荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为的探针与待测水样中的DNA分子杂交，将杂交细胞经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量分析，确定菌群数。

酶底物法(enzymesubstratetechnique)

酶底物法 （ enzyme substrate technique）的原理是 :利用大肠菌群细菌能产生β2半乳糖苷酶 （β2D2galactosidase）分解 ON 2PG （O rtho2 nitrophenyl2β2D2galactopyranoside ） 使培养液呈黄色 ,检测水样中是否含有大肠菌群。利用大肠埃希菌产生 β2葡萄 糖 醛 酸 酶 （ β2glucuronidase ） 分 解 MUG （ 42 methyl2umbelliferyl2β2D2glucuronide）使培养液在波长 366 nm紫外光下产生蓝色荧光 , 检测水样中是否含有大肠埃希菌。酶底物法有商品化试剂供应 ,实验操作简便 ,无需确认试验 ,可同时检测水样中大肠菌群和大肠埃希菌。如果改变培养温度 ,还可检测耐热大肠菌群。该方法检测周期短 , 18 ～24 h 即可报告结果。可见该方法较大的特点是节省了时间和人力。

怎样检测饮用水中的大肠菌群?

怎样检测饮用水中的大肠菌群？

(一)水样的采集

自来水取样：应在水打开放水5分钟，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每五百毫升水样加百分之三Na2S2O3.5H2O溶液一毫升。

(二)初发酵试验

1.水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液

2.接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h。此即5管法。

3.结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体和酸产生。在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为黄色，便可初步断定为阳性反应。