贵州大肠菌群检测系统常用指南「格维恩」

水中大肠菌群检测:(水样稀释)

1):制备水样10-1、10-2的稀释液:用无菌移液管吸取10mL水样,

2):将水样放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，使其中的细菌尽量呈单个存在,即为10-1稀释液。

3):再从10-1制备10-2稀释液,以此类推，稀释到所需倍数。

水中大肠菌群检测:（接种和培养）以无菌操作于5支三倍浓缩培养基(接种定应先检查杜汉氏小管内有无气泡)中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL， 小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。此即5管法。

结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体(杜汉氏小管内有无气体)和酸产生(培养基有无变色)。在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为黄色，便可初步断定为阳性反应。

乳糖蛋白水培养基试管的分离

1）自来水①初发酵：取2个装有50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨水培养基的三角烧瓶，各加入100mL水样；取10支装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨水培养基的试管，各加入10mL水样。混匀后，于37℃培养24h（24h未产气的继续培养至48h）。②平板分离：将24h培养后产酸、产气及48h培养后产酸、产气的发酵管（瓶）中的菌液，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，于37℃培养18～24h，将符合下列特征的菌落进行涂片、革兰氏染色和镜检：（a）深紫黑色、有金属光泽；（b）紫黑色、不带或略带金属光泽；（c）淡紫红色、中心颜色较深。③酵：经涂片、染色和镜检后，如为革兰氏阴性无芽孢，则挑取该菌落，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨水培养基试管中，每管可接种同类型菌落1～3个，于37℃培养24h，若结果是产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查附表11-2，即得大肠菌群数。

琼脂培养基的“培养法”需要花费时间来培养微生物

在品、化妆品及食品的生产、器具清洗等过程中，使用去除了杂质的纯化水。在此种用途的水中不能含有的杂质之一便是微生物。

即便是经过各种过滤及灭菌过程精制而成的水，有时也会因为在罐中储存或者是在管道中循环导致微生物繁殖，所以需要经常监视水中是否有微生物繁殖。

目前，作为微生物检测标准的方法，使用了琼脂培养基的“培养法”需要花费时间来培养微生物，由于需要计算微生物的数量，因此需要花费数日才能得出检测结果。

由于这些原因，需要进行水质管理的品行业和食品行业，一直在寻求能够在短时间内进行检测，而且与培养法具有同等检测性能的方法。

光学系统和流路系统的开发

水中微生物发出的荧光极其微弱，为了使激发光有效照射水中微生物，并且将微生物发出的荧光有效聚集到光接收元件后进行检测，重新开发出了独有的光学系统和流路系统。

作为光接收元件，在散射光强度很强时使用光电二极管，在检测微弱的荧光时采用光电倍增管。此外，关于流路系统，因为要将激发光照射到粒子上，并将产生的光传给光接收元件，所以开发出了使用透明材料做成的样本流路（流动池）。采用特殊的曲面形状构成的该流动池，在抑制内部反射的同时，能够使荧光有效地聚集到光接收元件上。